专业实践能力(A1/A2型题4)
一、A1/A2型题：每一道考试题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。请从中选择一个最佳答案。
1．ELISA间接法是检测抗体最常用的方法，利用酶标记的是
A．抗原
B．抗体
C．抗抗体
D．抗抗原
E．化合物

正确答案:C　解题思路：间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。
 
2．重组免疫印迹试验(recombinantstripimmunoblotassay，RIBA)与免疫印迹试验或蛋白印迹试验(westernblotas-say，WB)的不同在于
A．检测抗原
B．不用硝酸纤维素膜
C．直接应用病毒裂解的蛋白
D．不是直接应用病毒裂解的蛋白
E．使用病毒裂解后的病毒蛋白

正确答案:D　解题思路：重组免疫印迹试验(recombinantstripimmunoblotassay，RIBA)的原理不是直接应用病毒裂解的蛋白，而是应用重组蛋白或合成肽以条带形式吸附在硝酸纤维素膜条上（类似于蛋白印迹试验），当条上加入被测血清标本温育后，如果标本中含有特异性抗体时，则和相应抗原带结合形成抗原抗体复合物。
 
3．下列哪项不是HLA抗体检测方法
A．补体依赖细胞毒实验(CDC)
B．酶联免疫法(ELISA)
C．流式细胞仪法(flowcytometry)
D．单抗原磁珠法(luminexTMflowcytometry)
E．酶联免疫斑点检测(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)

正确答案:E　解题思路：补体依赖细胞毒实验又称微量淋巴细胞毒实验，是由美国洛杉矶加州大学的Pau1．Terasaki教授于1964年创建，主要原理是淋巴细胞具有HLA抗原，HLA抗体能结合到带有相应抗原的淋巴细胞膜上，补体可以结合并在淋巴细胞膜上使其死亡。如果淋巴细胞不带有相应的抗原，则无此作用。通过染色来观察细胞是否死亡来确定相应的抗原或抗体，酶联免疫法的基本原理是将HLA抗原包被在一个孔内，将患者血清加入孔中与孔内的HLA抗原反应，通过酶作用使其显色，用荧光仪根据吸收光的不同来判断结果，流式细胞仪法及单抗原磁珠法的基本原理都是将HLA单价抗原包被在不同颜色的微磁珠表面，用被检测血清与磁珠反应，血清中HLA特异性抗体便与包被在磁珠上的抗原结合，然后再与标记PE的二抗孵育。根据荧光强弱通过流式细胞仪检测出与这些磁珠对应的HLA抗体，单抗原磁珠法在普通流式细胞仪基础上进一步改进，并通过分析软件的更新，对于较弱的反应抗体也能准确检出。ELISPOT结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术（即ELISA技术），能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理就是用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色的方式将其表现出来。
 
4．导致交叉配血假阴性的原因不包括
A．试管污染洗涤剂
B．溶血现象
C．试验温度过高
D．血清中有高浓度血型物质
E．血清中可能存在的不规则抗体

正确答案:E　解题思路：血清中存在的不规则抗体可以使红细胞凝集而出现交叉配血不合的阳性结果。如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体，能凝集A1红细胞。此外还有抗Ⅰ抗体等。
 
5．下列哪项属于血小板血型抗原的基因分型检测技术
A．PIFT
B．MAIPA
C．放射免疫沉淀
D．PCR-SSP
E．ELISA

正确答案:D　解题思路：血小板免疫荧光试验(plateletantibodiesdetectionbyimmunofluorescencetest，PIFT)是Von-denBorne等于1978年发明的。该法用待测血清孵育已知血小板，洗涤，再与荧光物标记的抗球蛋白反应后洗涤，在荧光显微镜下观察结果。该法是较为可靠的血小板定型方法，1986年被国际血小板血清学研讨会确定为标准的参考方法。单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法(mono-clonalantibody-specificimmobizationofplateletantigen,MAIPA)是1987年Kiefel等确立的，是目前使用最为广泛的方法。该法先制备羊抗鼠IgG包被的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。此方法敏感度高、特异性强，即使是血小板上抗原数量很少的HPA-5抗原，也能检测出。MAIPA方法也可灵敏地检测血小板特异性抗体。放射免疫沉淀是使用放射性同位素标记的血小板膜蛋白，与受检血清结合．电泳分离后采用自身显影原理检测是否存在血小板抗体。单克隆抗体酶联免疫吸附试验用多聚甲醛固定抗血小板糖蛋白单克隆抗体后，加入待测血清，最后加辣根过氧化酶标记的羊抗人IgG，用底物邻苯二胺(O-phenylenediamine，OPD)显色。上述方法均属于血清学方法。而PCR-SSP(se-quencespecificprimer)即序列特异引物引导的PCR反应。其基本原理是设计特异性引物，利用引物3'端的特异性，直接扩增相应的HPA片段，PCR产物凝胶电泳检测DNA条带的存在或缺失，从而确定基因型。